96孔板测定细菌生物膜
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用96孔板结晶紫染色测定生物膜，测出来的每组之间的数据0D600差距很大，平行性不好。
这是我的实验步骤：
（1）在96孔聚苯乙烯微孔培养板中每孔加入100μl培养液，接种10μl过夜培养菌液，30°C静置孵育24h
(2)将培养液吸出，每孔加入200μl无菌PBS缓冲液清洗板孔3次；（要清洗得很干净吗？）
(3) 每孔加入100μl甲醇固定15min，然后吸出培养孔中的甲醇，自然风干；
(4) 每孔加入100μl 1%结晶紫溶液，室温下染色5min；
(5) 吸出培养孔中的结晶紫染色液后，用流水把多余的染料冲洗干净；（怎么判断多余的染料）
(6) 把培养板倒置在滤纸上除去残余的水，并在37°C烘箱中烘干或室温凉干；
(7) 完全干燥后，每孔加入100μl 33%冰乙酸溶液，在37°C培养箱中作用30min以溶解结晶紫；
(8) 590nm条件下，用酶标仪测定培养孔中溶液的OD值；
希望做过这方面的大佬，能给予帮助！谢谢大家
