ELISA求助

本人近两天做ELISA每次都遇到假阳性问题,大家帮我分析一下.
我做的是间接ELISA,包被的是细胞,并用1:1的甲醛和丙酮固定,然后封闭,洗涤,一抗都按常规,二抗(中山,羊抗鼠)1:1000稀释加入,随后仔细洗涤,应该没有残留,底物为OPD,并在490下测吸光值.结果如下:阴性对照(用细胞包被,只是没加一抗,别的步骤如上)OD为3点几,而我整个检测孔OD也都为3点几.奇怪的是我留了几个孔,什么都没加,什么都没包被和封闭,首次加的东西就是二抗,随后步骤同上,但OD值才0.5几.我设想不会这样,因为这几孔我没有封闭,加二抗后会非特异吸附,预计应该OD比我那些用细胞包被的孔大多了,大结果却这样.我觉得可能是由于我的二抗能和我的包被细胞特异结合.但我的包被细胞是人肿瘤细胞,二二抗是公司购买的羊抗鼠辣根过氧化物酶抗体,不可能有反应.
这几天很郁闷,不知道什么原因,大家帮我分析一下吧,谢谢!