【求助】Ki67免疫组化 检测组织细胞增殖

不知道园子里有没有战友做过Ki67的免疫组化，我刚才搜索了一下没有找到很多，归档贴有一个不过也是没有人给予回答的了。
Ki67作为一种核抗原，近些年来被认为是一种测定细胞增殖的一个重要指标。最近做IHC检测肿瘤组织与非肿瘤组织中细胞的增殖情况，因为是第一次做，参考抗体说明，并设置了三个不同的稀释度，方法按照常规免疫组化步骤进行，PBS代替一抗作隐形对照，ABC staining systerm 显色，苏木素复然20sec。但是三个抗体稀释度的结果都不是很理想：1、不论是胞浆还是核染色普遍较浅；2、感觉Ki67的特异性不是很好，没有很好的细胞定位，本来应该与细胞核中的Ki67抗原结合吧，但是却会在胞浆中发现有棕色出现。
针对这两个问题不知道各位战友有何看法，希望各位不吝赐教 谢谢

补充说明：检测的小鼠胃组织（发生肿瘤），IHC-P；Ki67抗体（Imgenex公司）；ABC（Santa）。