求助：WB湿转后marker变形移位、花了、飘了、散了，目的蛋白显影不佳。
发布于 2019-04-01 · 浏览 1.7 万 · IP 山东山东
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电泳完marker很整齐，转膜后marker变形移位，逛了逛园子，考虑了很多可能相关的因素，还是找不到具体的原因，很苦恼，这种情况第二天显影就会很差，不显影或者目的蛋白也变形移位。
一般同时跑两块较，同时转两张膜，有时候两张都很好，有时一张好一张变形，有时两张都变形，别人只是偶尔才出现一次，而我是经常出现（20-30%）
1.转模条件：恒流260mA，1h40min-2h均有，湿转仪器Bio-Rad。
2.胶：碧云天SDS-PAGE制胶试剂盒10或8%的下层胶，上层胶都一样。
3.PVDF膜：0.22的膜，用之前在甲醇中浸泡2min。
4.滤纸：电转液提前浸泡。
5.电转液：雅酶转膜缓冲液100ml+甲醇200ml+700ddH2O
1.转膜过程温度过高？（每次转膜的时候都在仪器槽内放冰袋，电转液4℃保持（之前是提前半小时预冷，现长期4℃保存），仪器外放冰袋和冰）
2.滤纸问题太厚太薄？（都是买的现成的滤纸，而且实验室其它小伙伴用都没事）
3.转膜夹没夹好？（都是常规操作）
4.气泡？（每次都认真赶气泡，应该不是气泡的问题吧）
求助各位站友，做WB做的很心累
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.7 万
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