科研小白的Trizol法提RNA经验--操作细节

刚开始Trizol法提RNA OD值260/230要么太低（1.4-1.6），要么太高（2.1-2.2），一段时间的摧残过后，终于可以总结出一些操作细节供参考。正文中只说明操作细节，具体的方法大同小异，楼主自己的会在评论区贴出。

1. 举例12孔板  TAKARA RNAiso Plus（9109）；

2. PBS冲洗一遍，每孔加Trizol，用qiang头“井”字法划孔底，并且吹打数次，收集到EP管中后重新吹打；

3. 离心后取上清用黄qiang头，控制速度慢吸，并且整个过程中qiang头保持在液面以下0.5-1mm；

4. 异丙醇离心完之后，有可能出现沉淀，有可能不出现，和细胞量有关，并且有些沉淀并不明显，表现为很透明的薄膜状，需要仔细辨别；弃异丙醇，我的Trizol说明书里面可以残留少量异丙醇，如果离心完可以观察到沉淀，我会蓝qiang头慢吸--白qiang头吸干，如果沉淀不明显，可以残留少量异丙醇；

5. 乙醇洗涤，沉淀会变明显，但由于洗涤的离心转速并不高、时间并不长，所以在弃乙醇的过程中，要比较慢的吸，否则可能误弃沉淀（尤其是半透明的沉淀）；

6. 弃乙醇：蓝qiang头慢吸--白qiang头吸干；室温开盖3min，具体以沉淀变为半透明为准，一般3min左右差不多；

7. 有些实验对RNA浓度有要求，可以500ul trizol/孔，合2孔为一个EP管，溶解时加少量DEPC水（我一般用20ul，若对浓度有要求会降到10ul）。

8. OD值结果：太低---有机物污染：我的整个操作很注意无酶，但一段时间仍然有这个bug，后来发现是乙醇没有弃干净，所以我的经验是要吸干；

                      太高---DNA污染：加入氯仿离心后，上清液取的时候速度太快，后来控制了速度也改换了黄qiang头就好很多了。

祝大家早日过了这个实验~