millipore超滤管浓缩蛋白速度很慢是什么原因

今天我用 15ml 10KD截断分子量的millipore超滤管浓缩60K的目的蛋白，按说明用超纯水浸润膜30min后，开始超滤，我上样了5ml，4000g超滤30min后发现只离心下来不到1ml，然后只能延长时间，中间取出来看的时候没有发现明显的蛋白沉淀，然后我还用移液*混匀了一下浓缩液，前前后后花了大概2h吧，最后还是剩下1ml，晚上把滤出液和浓缩液都拿去跑电泳了，明天会有结果，但我用100ul Bradford粗侧了一下，浓缩液都没什么颜色变化。。感觉很悬

另外结束后我先用超纯水洗膜，再用0.2M NaOH浸泡20min,接着又去离心10min，离下来的液体大概就几百微升，这样正常吗，管子没用过啊，按理说膜上微量的甘油应该也被NaOH的作用消除了吧，应该不会影响水的通过啊

请大家给点建议吧 谢谢各位