求助，求助，求助，PD1/PDL1免疫组化的实验求助。

购买Abcam家的试剂，PD1(ab137132)，PDL1(ab205921)按照病理科进行免疫组化实验步骤进行操作浓度(1:100,1:200,1:400)

1.抗原修复液使用了枸橼酸钠(ph6.0)，高压热修复，喷气后2分钟结束，放置冷水自然复温后，冷水冲洗；

2.用免疫组化PAP笔在距离组织边缘0.5cm画圈，每张滴加3%过氧化氢溶液，室温下孵育10分钟，以阻断内源性过氧化物酶。PBS冲洗3次，每次3分钟。

3.甩去PBS，加封闭羊血清封闭，20分钟，后甩去羊血清，滴加一抗，冰箱4℃过夜，PBS冲洗3次，每次3分钟；

4.甩去PBS，每张切片滴加二抗（1:300,1:100均做过）室温敷育30分钟PBS洗3次，每次3分钟；

5.甩去PBS，每张切片滴加适量新鲜配置的DAB，镜下适时控制显色时间，以无背景着色，阳性部位较强着色为准。阳性显色为棕色。

6.自来水冲洗，苏木素复染5分钟，0.1%盐酸酒精分化，自来水冲洗返蓝5分钟；

7.80%,95%,无水乙醇脱水，各2分钟，I,II,III级二甲苯透明1分钟；

8 封片。

这是基本步骤，后来进行的调整有:1.抗原修复用过edta(ph9.0)进行抗原修复，修复过程类似枸橼酸钠，2.一抗由4℃过夜延长至2天，3.不再进行羊血清封闭，4.二抗和DAB显色使用病理科试剂。最后都没有阳性结果。主要在扁桃体组织中做，子宫内膜癌就做了2例，胎盘绒毛1例均没有结果。病理科老师，他们自己最近做了扁桃体和胎盘绒毛的预实验他们的出结果了，他们建议我更换新的厂家试剂。求助大神，给予指导建议。谢谢，谢谢。