HPLC
本人刚进入科研领域不久。现课题要求用HPLC检测小鼠大脑PFC与纹状体中多巴胺及其代谢物浓度,我对此有几个疑问,希望有做过相关研究的大侠留足讨论,给予指导。
1.样品预处理:
1)文献上有人用高氯酸对样品进行预处理,蛋白沉淀率高。但,我使用的柱子是C18,高氯酸处理后样品会不会过酸导致废柱子?高氯酸的浓度是多少?
2)有人说高氯酸洗脱后可以用碳酸钾盐调整PH值,具体怎么操作。
3)有文献是用三氯甲烷萃取的,蛋白沉淀率与高氯酸比效果如何?
4)小鼠断头,在冰上快速取脑,分离脑区后,液氮冷冻后-80°C保存,最长时间能保存多久?
5)我做的小鼠模型年龄很小,脑组织少,HPLC做这个多巴胺测定最低需要多大的样品量?
6)现有的HPLC仪检测器有DAD(二极管阵列检测器)和荧光检测器还有太蒸发光散射检测器,但是没有电化学检测器。我查询的文献里使用的是电化学检测器。所以我想知道,我可以用文献里的样品处理方法,包括流动相的试剂选择及参数等来套用在现有的机器吗?会否有影响?
望有知情的大侠不吝赐教,如有更好的处理方法请告之,小子不胜感激。
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 457