【求助】western做成这样，各位大神们帮我分析分析是什么原因

最近的western老是这样的结果。我电泳时上样量是15微升，样品是转染后裂解细胞收的上清。电泳时先用80V，再用130V。转膜是100毫安，两小时。5%奶粉/PBST封闭过夜。上面的是目的条带，下面是actin作为内参。