【求助】SDS-PAGE电泳条带弥散严重···急死了···

做的是蜘蛛吐出来的消化液的电泳分析（预测是蛋白酶之类的）
加过loading buffer 比例1:1（体积比）
上样前煮沸5min，离心处理10000rpm/min，1min
上样量在10ul-15ul不等，marker上样5ul条带正常。
电泳后染色为25%无水乙醇，10%冰醋酸，0.1%的考马斯G-250混合，染色30min，固定液为25%异丙醇+10%冰醋酸混合，固定10min，脱色液为5%的无水乙醇，10%的冰醋酸混合，直至背景色褪去。
但是为什么样品条带会出现这样的问题······严重弥散唉···都快哭了···

试剂配比：

1、分离胶缓冲液：Tirs 18.17g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 调至pH8.8，加蒸馏水定容至100ml，其中Tris 为1.5mol/L，SDS为0.4%
2、浓缩胶缓冲液：Tris 6.0g，SDS 0.4g 溶于水，用3mol/L HCl 调至pH6.8，加蒸馏水定容至100ml，其中Tris为0.5mol/L，SDS为 0.4%
3、Arc/Bis：Arc 29.2g，Bis 0.8g 加蒸馏水溶解，定容至100ml，过滤后装入棕色试剂瓶，4℃避光保存。
4、10%过硫酸铵：1g过硫酸铵溶于10ml去离子水中。
5、1*SDS-样品缓冲液（10ml）：甘油 1.0g，SDS 0.2g，β-巯基乙醇 0.5ml，溴酚蓝 0.012%（W/V）
加0.25mol/L Tris-HCl（pH 6.8)到10.0ml
6、电极缓冲液：Tris 3.03g，甘氨酸14.4g，SDS 1.0g，溶于蒸馏水（pH 8.3），定容至1000ml。

求大神高人指点···谢谢谢谢！！！