【求助】急~~~已转化大肠杆菌从AMP平板接种至AMP试管摇瓶后不生长

本人做的是大肠杆菌增殖酵母HC、LC表达载体，已转化完，得到了单克隆平板，先从平板上挑单克隆于5mlLB试管内摇瓶培养，出现上述问题————从amp+平板上挑的单克隆在amp+试管中摇瓶不生长，过夜后菌液（12-16小时）依旧澄清

思前想后 只有一下几种可能会导致上述情况发生，但是分析后发现都不成立：1试管amp浓度过高——用的是浓度是100ug/m，文献和了解的人的实验习惯都是这个值l；2转化失败——但是是从amp＋平板上挑过来接种的，就算是环状质粒也应该在瓶中生长；3划平板时培养时间过长，导致不在对数期——18:00-9:00，培养时间在15小时，并未过长。4amp＋平板未加amp且转化失败——两种事件同时发生的概率几乎为0。

连续摇了3次都澄清，已做过对照用amp-试管摇瓶过夜后就浑浊了，百思不得其解.........

之后本来该提质粒跑胶检测下是否转化成功，现在无菌液可提...急

希望有识大神帮忙给小弟解答下或者给点建议~~也欢迎出现过类似情况的同志们来共同探讨~~