【求助】急求！！内参上样量怎么调

本人做wb已经有一段时间 所在的实验室师哥师姐做的时候都不进行蛋白定量 做出的内参根据肉眼看大致灰度 根据灰度的不同进行上样量的微调 最后内参感觉一致根据调整好的上样量做目的基因 然后扫灰度 然后进行目的和内参的比值。
我想问一下1 这样做出来的结果根据肉眼调节可靠度怎么样？
2 老师建议我如果不进行蛋白定量但是保证上样量相同，例如都加6ul，目的内参分子量相差不大跑在一板胶上（避免上样和配胶的误差）。但是跑出来的内参可能灰度有差异，也不用调节内参，直接用目的比上内参求比值。这样做可不可以，因为wb是一个半定量的，都是最后看比值。
希望能够得到大家的回复，众人拾柴火焰高，希望得到大家的帮助，解决我的困扰。谢谢！！期待你的回复！！