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【求助】求教!晕眩中,lipo2000转染SIRNA,对照强荧光,但WESTERN无结果

泌尿外科医师 · 最后编辑于 2013-02-14 · IP 上海上海
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这个帖子发布于 12 年零 129 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
用lipofenctamine 2000转染前列腺癌细胞系LNCAP
使用的SIRNA是锐博的SIRNA套装,套装中包括目的SIRNA,阳性GAPDH对照,阴性NCONTROL对照
使用invirogen公司的protocal,即细胞50%时加入脂质体和SIRNA,SIRNA终浓度100nM.
做了目的SIRNA,荧光对照,GAPDH阳性对照,空白对照。
目的基因有CDH1和ABCC1,各3个序列。
荧光对照和CDH1的SIRNA反复冻融过6次。GAPDH和ABC的SIRNA刚从冻干粉溶解就用了。
具体方法:脂质体和SIRNA和OPTIMEM混合各5分钟,然后两者混合20分钟,上样。
大约54小时时收取标本。
荧光对照的标本如图,至少说明我应该按照正确的试验步骤做了

可是可是 跑了WESTERN,6个目的SIRNA和1个阳性GAPDH的结果都是没有差异啊?
特此求助可能的原因是什么呀?
已经没有头绪了,求各路大神驻足给个方向吧~

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