【求助】背根神经节免疫荧光求助
发布于 2012-11-23 · 浏览 3025 · IP 浙江浙江
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各位战友，小弟最近在做背根神经节（DRG）上阿片肽受体的表达，采用免疫荧光方法检测。kappa受体和delta受体出来的都很顺利，就是mu受体的表达总是出现在细胞核部分，理论上应该出现在细胞浆和细胞膜上，文献也支持mu受体在细胞浆表达。方法改了好几次，一直没有出理想的结果，有没人做过类似的工作啊，帮我分析分析。
实验步骤如下：
1. 大鼠处死，4%多聚甲醛灌注，30%蔗糖脱水，液氮速冻后保存。
2. 冰冻切片，厚度15um。
3. 5%驴血清，0.3%Triton X-100，PBS37度封闭1h。
4. 无清洗，5%驴血清，0.3%Triton X-100，PBS37度1：1000一抗（兔抗大鼠，abCAM公司，货号ab10275）4度孵育过夜。
5. 次日， 37度复温 1h。
6. 5%驴血清，1:1000荧光标记二抗（驴抗兔，molecular probes）37度孵育2h。
7. 封片，拍照。
8. 各步骤，均PBS清洗。
上述步骤中，抗体浓度，驴血清浓度和Triton浓度都多次调整，做出来的结果差别不大。所以现在找不到，具体问题。
这个是kappa受体的结果。
实验步骤如下：
1. 大鼠处死，4%多聚甲醛灌注，30%蔗糖脱水，液氮速冻后保存。
2. 冰冻切片，厚度15um。
3. 5%驴血清，0.3%Triton X-100，PBS37度封闭1h。
4. 无清洗，5%驴血清，0.3%Triton X-100，PBS37度1：1000一抗（兔抗大鼠，abCAM公司，货号ab10275）4度孵育过夜。
5. 次日， 37度复温 1h。
6. 5%驴血清，1:1000荧光标记二抗（驴抗兔，molecular probes）37度孵育2h。
7. 封片，拍照。
8. 各步骤，均PBS清洗。
上述步骤中，抗体浓度，驴血清浓度和Triton浓度都多次调整，做出来的结果差别不大。所以现在找不到，具体问题。
这个是kappa受体的结果。
最后编辑于 2012-11-23 · 浏览 3025
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