【求助】丙酮沉淀后蛋白复溶的问题
发布于 2012-11-15 · 浏览 1.0 万 · IP 北京北京
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yj1984ren 推荐请教大家一个问题：itraq做4标实验，用丙酮沉淀后蛋白很难复溶，不知道什么原因。一般大家是怎么沉淀的呢？我的操作如下：100ug蛋白加6倍体积国产丙酮，（加完丙酮后没有涡旋或者离心，因为会有好多絮状刚形成的沉淀挂壁），-20度沉淀过夜。第二天离心4000g,5min.洗去上清，看到有大概50ul-80ul体积的白色蛋白沉淀。开盖挥干丙酮，大概40-50min,直到蛋白变成很薄很薄的透明片紧贴在管壁上，加入itraq试剂盒自带的溶解buffer，按要求加了20ul不溶，又追加20ul还是不溶解啊，一直都有片状物或者是白色悬浮小颗粒，怎么涡旋都不溶解。请问大家有什么好方法嘛？我做的哪步是不是有问题呢？接着超声可以吗？谢谢~~
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1.0 万
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