【求助】用protein G 纯化小鼠腹水中单抗的问题
发布于 2011-12-07 · 浏览 2050 · IP 未知未知
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用默克密理博的Protein G 来纯化小鼠腹水中的单克隆抗体，可是总是在流过液总检测到抗体，在洗脱液中检测不到，说明里面的抗体没有被protein G捕获。操作完全按照他们的说明书进行的，并且试过用pH5.5--8.5的不同TBS对腹水进行稀释。用同一个柱子挂兔血清中的多抗就能够挂上，说明应该不是柱子的问题。不知道有没有人遇到过类似的问题？请给一些建议。用ELISA和western检测腹水中有目的抗体，分型试剂盒分型，IgG1和IgM的都是阳性。不过以前别人帮助纯化的是IgG1。过柱子后，流过液能用ELISA和western检测到活性，洗脱液没有检测到活性（电泳有时有条带，但是没有活性，大部分时候没有条带。估计不是目的抗体）。
1：小鼠腹水稀释5倍；2--6：腹水用不同pH的binding buffer（6.0-8.5）；binding buffer：20mM Tris，1M Nacl。
binding buffer：20mM Tris也用过，结果是一样的。
不知道72附近那条很亮的带是什么？会不会是那条带影响了结合？
1：小鼠腹水稀释5倍；2--6：腹水用不同pH的binding buffer（6.0-8.5）；binding buffer：20mM Tris，1M Nacl。
binding buffer：20mM Tris也用过，结果是一样的。
不知道72附近那条很亮的带是什么？会不会是那条带影响了结合？
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 2050
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