【求助】关于HRP标记多抗的出现的一些问题

帖子有点长，希望大家能有耐心读完，有经验的朋友帮我指点迷津。

做抗体标记的试验有一段时间了，用的是改良的过碘酸钠法，抗体和酶的比例为1:1。开始做的是单抗的HRP标记，做了几次改进摸索后，效果还不错，未纯化的酶结合物效价在1:10000（抗体效价为1:10万），酶结合物效价的检测方法是包被抗原，然后用标记的单抗作用，显色读数——即直接ELISA法。最近开始尝试标记多抗，相同的方法，也是用直接ELISA检测（即抗原包被、标记的多抗作用、显色），但几乎不显色，只1:100稀释读数为0.2几（多抗效价在1：20万），试验重复了2次了，结果相似。

我的问题是：

1.我的检测方法对么，HRP标记多抗是否可以用直接ELISA法检测？如果可以，那么我的实验问题可能出现在哪里？

2.如果我的检测方法不正确，应该采用什么方法比较准确？

3.我的标记方法是否有问题？换句话说，单抗和多抗的标记方法是否相同？