【求助】提取突触膜蛋白相关方法请教

大家好！

我研究大鼠特定脑区一受体亚基在突触膜上的表达变化，需要提出突触膜蛋白先做western。请教各位高手用什么未作内参，以及用什么方法来验证我提取的就是突触膜蛋白呢？

我目前采用的方法是蔗糖梯度离心，由于标本有限，如何能够达到即可以提取总蛋白，又提取突触膜蛋白？请教大家最后是如何统计的，只用膜蛋白的绝对灰度么？可是那样没有内参如何保证蛋白含量是一致的（由于蛋白定量不见得特别准确）。又或者是用膜蛋白/总蛋白的比例来验证。请教各位这方面的情况。

另外以后会为了更准确的位置验证，会做荧光，那么能用什么东西来标记出突触的形态呢？好进一步证明我的蛋白的变化的确发生在膜上，有没有一种东西能标记出突触膜的形态。这样双标就能说明问题了。

请大家帮忙啊！