【求助】Pnpp法测定脂肪酶的问题
发布于 2011-05-16 · 浏览 5062 · IP 陕西陕西
这个帖子发布于 13 年零 363 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用的p-NPP（对硝基苯棕榈酸酯）法测脂肪酶活性，1mmol/L p-NPP的配置方法是：先0.0378g p-NPP再加入1mL曲拉通-100与5mL异丙醇再用Tris-HCl（pH8.0）定容至100mL。
测定酶的活性时：取1.5mL 1mmol/L的p-NPP与1.5mLTris-HCl（pH8.0)再加入0.5mL粗酶液10min后再加入8.2mL蒸馏水，对照以0.5mL 90度酶活的粗酶液其他条件相同。紫外410nm处测吸光度。
但我现在出现问题是：1 灭活的酶液的吸光度比没有灭活的要高 2 配置p-NPP溶液时p-Npp并不完全溶解 3 即使待测酶是标准的脂肪酶10min后也不会发现明显的颜色变化。
请问是什么原因，谢谢！！！
测定酶的活性时：取1.5mL 1mmol/L的p-NPP与1.5mLTris-HCl（pH8.0)再加入0.5mL粗酶液10min后再加入8.2mL蒸馏水，对照以0.5mL 90度酶活的粗酶液其他条件相同。紫外410nm处测吸光度。
但我现在出现问题是：1 灭活的酶液的吸光度比没有灭活的要高 2 配置p-NPP溶液时p-Npp并不完全溶解 3 即使待测酶是标准的脂肪酶10min后也不会发现明显的颜色变化。
请问是什么原因，谢谢！！！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5062
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