【求助】BSP
这个帖子发布于 15 年零 4 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好，我最近在做BSP，因为引物是新合成的，所以用巢式PCR做了个梯度，但最后跑胶结果，只有几个孔有目的带，大多数都是拖带的，以下是我的PCR体系和反应程序，大家看看，给点意见吧，看怎样优化一下!
第一次PCR：
体系10ul，
TAKAR EX热启动酶 0.05ul
Buffer 1 ul
dNTP 0.8 ul
引物F（20um） 0.1ul
R 0.1ul
DNA (20ng/ul) 0.5ul
DdH2O 补至10ul
PCR 程序：
94 3min
94 30s
50/65 30s 35cycle
72 1 min
72 5min
16 ferever
第二次PCR，体系和第一次一样，但模板是第一次PCR产物，我加了2ul
而第二次反应程序和第一次的一样。
[img][/img]
第一次PCR：
体系10ul，
TAKAR EX热启动酶 0.05ul
Buffer 1 ul
dNTP 0.8 ul
引物F（20um） 0.1ul
R 0.1ul
DNA (20ng/ul) 0.5ul
DdH2O 补至10ul
PCR 程序：
94 3min
94 30s
50/65 30s 35cycle
72 1 min
72 5min
16 ferever
第二次PCR，体系和第一次一样，但模板是第一次PCR产物，我加了2ul
而第二次反应程序和第一次的一样。
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