【求助】western blot 结果分析（有图）

各位兄弟姐妹，小弟初做western blot,结果不理想，请大家帮我分析原因，应该如何改进？谢谢！
我做的是smad3蛋白，大小54KD，上样每孔总蛋白量是88微克，共七个样本，用10%分离胶，电泳跑了2小时，转膜2小时（纤维素膜），一抗用的是santa cruz smad3单克隆抗体，5%牛奶稀释1： 200，二抗1：800（奥德赛远红外荧光标记抗体，此为推荐浓度）。一抗牛奶封闭1小时，4度过夜，二抗37度一小时，图一为smad3，图二是另外一张膜加样都一样，一抗β-actin(1:10000), 二抗也是奥德赛的，浓度（1：25000），marker从上到下第三条是55KD，第四条是47KD(从下到上数是第四条55KD和第三条47KD)，但是最后做出来1.非特异性条带很多2.55KD附近我的目的蛋白我认为没有，问题出在哪里，应该如何改进，请大家指教。