【求助】那位大侠帮忙给看一下，是阳性染色吗？
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我做的是冰冻切片
取材方法：大鼠麻醉后，打开胸腔，用灌注针刺入左心室，剪开右心耳。用新配制等渗的PBS冲洗，见流出液体发白后，推注多聚甲醛溶液，先快后慢进行固定。然后打开鼠脑，取出鼠脑，放入多聚甲醛固定，然后再放入30%蔗糖沉底3天后，在恒温切片机进行冰冻切片，冰冻温度为-26°C。切片厚度为30.放入PBS内，用漂浮法。取几张脑片染色。多余放到PBS液体保存，入4°C冰箱保存。
染色步骤：3%过氧化氢溶液10分钟，蒸馏水洗。BSA封闭20分钟，不洗入一抗，4°C过夜，大约12-14个小时，PBS洗。入二抗37°C孵育30分钟，PBS洗。入SABC，37°C孵育30分钟。PBS洗，然后DAB显色。（漂浮法可以不用抗原修复，我就没做）。过程中容易碎片，怎么解决？冰冻中脑组织太大，不好切，是不是冻硬点好切？请那位高手指点下，不甚感谢。另附染色的切片，看看是否是阳性？
1.10倍
2.40倍
取材方法：大鼠麻醉后，打开胸腔，用灌注针刺入左心室，剪开右心耳。用新配制等渗的PBS冲洗，见流出液体发白后，推注多聚甲醛溶液，先快后慢进行固定。然后打开鼠脑，取出鼠脑，放入多聚甲醛固定，然后再放入30%蔗糖沉底3天后，在恒温切片机进行冰冻切片，冰冻温度为-26°C。切片厚度为30.放入PBS内，用漂浮法。取几张脑片染色。多余放到PBS液体保存，入4°C冰箱保存。
染色步骤：3%过氧化氢溶液10分钟，蒸馏水洗。BSA封闭20分钟，不洗入一抗，4°C过夜，大约12-14个小时，PBS洗。入二抗37°C孵育30分钟，PBS洗。入SABC，37°C孵育30分钟。PBS洗，然后DAB显色。（漂浮法可以不用抗原修复，我就没做）。过程中容易碎片，怎么解决？冰冻中脑组织太大，不好切，是不是冻硬点好切？请那位高手指点下，不甚感谢。另附染色的切片，看看是否是阳性？
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