【求助】大家看看我的DNA ladder哪里出了问题?另有TUNEL问题请教
阳性对照10uM CPT作用于BEL-7402细胞24h没有出现明显的DNA ladder,表现出smear,而根据文献报道CPT可以诱导细胞凋亡的啊!而且我在收样前肉眼观察细胞已经有60%左右细胞漂起来了。
结果见下图:
泳道1:AXYGEN 100bp DNA ladder
泳道2:BEL-7402细胞 control组
泳道3:CPT 10uM作用24h
泳道4:样品 10uM
请大家帮我分析一下具体可能是什么地方出现了问题?
另外,我看到说如果出现坏死,也不会出现ladder而呈现成片的现象,但是CPT明确可以诱导细胞凋亡的啊?
难不成是所选细胞类型的问题?近期打算换株明确的细胞试试看。
再者就是kit的问题?
另外请教大家,通常我们做贴壁细胞的TUNEL实验是将细胞接种于玻片上,然后在湿盒里孵育TUNEl反应液的。但是药物处理后贴壁细胞细胞漂浮起来了,这样经过清洗玻片等步骤以后漂浮细胞都损失掉了,因此测出来的结果肯定是不准的。大家有没有什么好方法可以解决这个问题,换个方式问也就是悬浮细胞如何进行TUNEL检测呢?包被多聚赖氨酸和甩板的方法好像都不是很好用。
期待大家的意见,先谢谢了!
