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【求助】大家看看我的DNA ladder哪里出了问题?另有TUNEL问题请教

最后编辑于 2009-06-19 · IP 上海上海
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这个帖子发布于 16 年零 5 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
最近在做DNA ladder实验,用的是离心柱式抽提kit(碧云天公司),非传统酚氯仿抽提酒精沉淀的方法。结果却做不出ladder。

阳性对照10uM CPT作用于BEL-7402细胞24h没有出现明显的DNA ladder,表现出smear,而根据文献报道CPT可以诱导细胞凋亡的啊!而且我在收样前肉眼观察细胞已经有60%左右细胞漂起来了。

结果见下图:
泳道1:AXYGEN 100bp DNA ladder
泳道2:BEL-7402细胞 control组
泳道3:CPT 10uM作用24h
泳道4:样品 10uM

请大家帮我分析一下具体可能是什么地方出现了问题?
另外,我看到说如果出现坏死,也不会出现ladder而呈现成片的现象,但是CPT明确可以诱导细胞凋亡的啊?
难不成是所选细胞类型的问题?近期打算换株明确的细胞试试看。
再者就是kit的问题?

另外请教大家,通常我们做贴壁细胞的TUNEL实验是将细胞接种于玻片上,然后在湿盒里孵育TUNEl反应液的。但是药物处理后贴壁细胞细胞漂浮起来了,这样经过清洗玻片等步骤以后漂浮细胞都损失掉了,因此测出来的结果肯定是不准的。大家有没有什么好方法可以解决这个问题,换个方式问也就是悬浮细胞如何进行TUNEL检测呢?包被多聚赖氨酸和甩板的方法好像都不是很好用。

期待大家的意见,先谢谢了!
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