【求助】易错PCR

一直在做脂肪酶的定向进化，采用的是易错PCR的方法，做了好几批，一直都没有结果，镁离子的浓度控制在5mM/L，锰离子浓度分别为0.1、0.2、0.3mM/L，另外还有一个是镁离子浓度为3mM/L而锰离子浓度为0.3mM/L，PCR条带可以很清晰的跑出来，可到了转化到毕赤酵母后，都不表达脂肪酶了，原先采用的脂肪酶基因的模板转化到酵母后酶活可高达800U/ml
已到研二了，做了好几批的易错PCR，一直都没有结果，很是着急，望大侠们赐教，先谢过了