【求助】毕赤酵母表达抗菌肽,如何提高表达量?
最近我在利用毕赤酵母系统表达抗菌肽,主要是进行条件的摸索 和优化,希望能够提高表达量。表达产物抗菌肽是通过电泳和药敏试验来进行鉴定的。我主要通过以下条件的摸索来进行优化:
1、培养基pH值
2、诱导甲醇的浓度
3、诱导时间
4、诱导温度
5、普通摇瓶和挡板摇瓶
这几个条件正在试验中。
但是,在最近的试验中,我发现接种量多少对表达量似乎也有较大的影响,我的操作步骤是:
(1)挑YPDSZ平板上单个菌落接入YPDSZ液体培养基,30度230rpm振摇22-24h——
(2)然后1:100接入BMGY中,30度230rpm22-24h——
(3)菌体沉淀接入BMMY中,30度230rpm甲醇诱导表达96h。
在这个期间,每次YPDSZ液体里摇的时候,菌体都非常浓,用DNA/RNA微量测定仪测OD600,稀释100倍后OD值才为1.34,请问这样的浓度1:100接种是否过大呢?如果以230rpm摇菌,摇24h时间是不是太长了?菌体过浓的话,毕赤酵母表达量会否收到影响?请有经验的战友帮我分析一下,不胜感激,谢谢!