【交流】免疫荧光染色成功经验的总结

背景：2008年07月04日接到老板分配的新任务之一——做肝脏组织ZO-1（一种胞膜蛋白，紧密连接蛋白）免疫荧光染色，以前我对酶免疫组化很熟悉，在园子内也有不少置顶贴，但免疫荧光一直还没做过（原理知道，但细节不太了解）。

过程：我先用石蜡切片做了5次，结果一直不理想；近几日，我又切了冰冻切片，做了2次，终于基本成功了。在这个过程中，我对免疫荧光染色技术有了全新的认识，故发出此贴以便于与大家进行分享和讨论（前些天发出免疫荧光求助贴，回复的很少，所以有必要加强对免疫荧光方面的讨论），不妥之处敬请指正。

问题：

1、石蜡切片能否做免疫荧光染色？
2、冰冻切片和石蜡切片各自的优劣之处是什么？
3、一抗孵育的条件和浓度如何摸索？
4、二抗孵育条件、浓度以及其它要点是什么？
5、如何最大限度地降低非特异性染色和背景着色？
6、如何避免荧光素提前衰退？
7、普通荧光显微镜的操作指南和注意事项？
...................................

接下来，我来整理我近来的实践思考和论坛理论学习。同时十分欢迎大家进行交流、讨论和资源共享。

相关链接：

【整理】免疫荧光组织（细胞）化学和免疫胶体金技术大全（原理、试剂和器材、操作流程、常见问题及其解决方法）
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=12161412&sty=3&keywords=%C3%E2%D2%DF%D3%AB%B9%E2
【求助】免疫荧光问题请教(十分紧急)
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=68&id=12251272&sty=3&keywords=%C3%E2%D2%DF%D3%AB%B9%E2
【原创】免疫组化技术常见问题及其解答集锦（不断更新中）
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=161&id=12306255&sty=3&keywords=%C3%E2%D2%DF%D3%AB%B9%E2
【原创】常用蛋白质水平检测方法比较
http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=65&id=12239892&sty=3&keywords=%C3%E2%D2%DF%D3%AB%B9%E2