【求助】western blot过程中的疑问

问题一：铺完１２％分离胶后加异丙醇，胶凝后底部出现一层液体（１～２mm），如果没液体那层就是空的，这对电泳有何影响？罐胶架上两层玻璃板的底是压在橡胶上的，不漏胶．
问题二：我用异丙醇封胶，1小时左右胶就凝了，但用蒸馏水封2h也不凝，这是为什么？？
问题三：不加样的孔，可以不加等体积的１x buffer吗？不加会怎么样？
问题四：经过一抗，二抗过程后，显色条带是细线状（一抗，二抗都是单克隆），这正常吗？