（共享） 免疫组化操作流程

免疫组化操作流程（PAP法、ABC法）
1.  脱蜡至水：二甲苯（1）、（2）脱蜡各15min→无水乙醇（1）、（2）各5min→90%乙醇5min→水洗→PBS5min
2.  抗原修复：1）微波修复：微波中高档5min 3次→自然冷却至室温→PBS过一遍
2）酶消化：0.1%胰蛋白酶37℃孵育30min→ PBS5min 3次
3.  阻断内源性过氧化物酶：置3% 双氧水浸泡15min →PBS5min 3次
4.  封闭：10%正常二抗血清室温10min
5.  一抗孵育：甩去血清后加一抗，置湿盒内4℃过夜→PBS5min 3次
6.  二抗孵育：擦片后加二抗，置湿盒内37℃孵育30min→PBS5min 3次
7.  PAP或SABC孵育：擦片后加PAP或SABC，置湿盒内37℃30min→PBS5min 3次
8.  显色：DAB-H2O2显色10min左右，镜下控制→水洗终止显色
9.  复染：苏木素复染1min→水洗至变蓝→1%盐酸乙醇分化→水洗至变蓝
10.  封片：无水乙醇脱水5min 2次→二甲苯透明5min 2次→中性树胶封片
注意事项：
1)  DAB为致癌物，操作时带手套，用专用染色缸染色，染色后将染色用具清洗干净，滤纸和小木棍用后丢弃。
2)  微波修复时外缸内不能有水，否则容易将染缸煮破。
3)  所有操作步骤中，均应注意防止干片，以免产生非特异性显色。
4)  PBS配方： Na2HPO4 37.3g
KH2PO4 4.3g 加蒸馏水至10000ml(PBS瓶划蓝线处)
NaCl 68g