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核糖核酸组学医学生

11 小时前

（求助）往环状质粒里面插入一碱基是可以实现的吗

我们有一个质粒缺失了一碱基，现在想通过类似点突变的方法，往质粒里面插入一碱基。有尝试设计在设计引物时，往正向反向引物的尾端加上一碱基和在引物中间的位置加一碱基，但是最后测序结果都显示没有成功突变。

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医疗行业从业者

11 小时前

卵巢摘除实验#生物实验室

病例信息卵巢摘除实验#生物实验室病例讨论

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27 浏览

人体免疫学医学生

14 小时前

转染及siRNA的转染

除了实验组外，还要再加一个Mock Transfaction。1转染前一天，接种细胞到6孔板中，每孔1×10^6cells，密度为50%以上转染比较合适。2第二天取出前一天的细胞，离心，用1×PBS洗一遍之后，离心，更换新的培养基，这里的培养基为预热的DMEM basic，每孔加2mL。注意动作轻柔，以免细胞状态不好。3配转染液：准备2个EP管，分别加入250ul的opti-MEM。4取已经计算好的siRNA，每孔100pmol，相当于20umol的5ul，逐滴加入，用小枪头靠近液面慢慢打出，轻轻吹打混匀（一定要轻轻地），标记为siRNA管。5吸取适量lipo 2000（6孔板用10ul）于另

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不搞科研的药学僧

医疗行业从业者

14 小时前

小鼠原代肝细胞分离提取技术 (经验帖)

孤苦伶仃，苦干五个月，终于成功了。实验期间各种坑都填过，该绕的弯路也都绕了，证明这套提取方法相当可靠，感谢论坛曾经的帮助，现在把core protocol共享，有问题欢迎楼下讨论。如果已经做过一阵子原代肝细胞提取的话，对一些基本的实验操作和流程应该都比较熟悉了，论坛里也有一些经验贴。下面分享几点我认为成功分离原代肝细胞的关键:1.动物我用的C57，同等周龄下，下腔静脉或者门静脉要比Balb/c粗壮很多，方便进针置管。2.严格控制灌流速度，小鼠的最佳速度是5ml每分钟，推荐最好用蠕动泵代替手工注射器，灌流过程中保证灌流液的温度。3.我认为最最最关键的一点就是胶原酶的浓度！！！(重点) 文献里提到

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8.7 万浏览 · 989 讨论

微生物药物学医学生

16 小时前

小鼠活体成像为什么没有荧光？

求助！我最近做了一批小鼠的原位癌模型，想通过活体成像追踪肿瘤大小，但目前接种一周了，拍照却没有看到荧光，细胞我们之前用双报告基因检测过，读数一直稳定在八九位左右，所以我们当时觉得应该转进去了。现在拍照没有看到荧光可能是什么原因呢？帮我们拍照的老师怀疑是我们细胞活力不行，没有成瘤，但我们之前做过预实验是100%成瘤的，而且我觉得不至于差到一只都不成吧。求各路大神有经验的指点一下，拜托拜托！# 5月实验难题 #

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梦中医学界扛把子

药学其他学科医学生

17 小时前

请教下各位这几个的区别、作用和中文名称NAD，NADH，NADP，NAD（P）H，NADPH

NAD，NADH，NADP，NAD（P）H，NADPH跪着请教下各位这几个的区别、作用和中文名称，我实在分不清楚，我知道加氢、加磷酸基团，但我缕不顺它们，什么情况下会发生改变NAD（P）H和NADH，NADP一样吗

381 浏览 · 6 讨论

医疗行业从业者

18 小时前

宫颈炎/糜烂的大鼠模型

哪位大神构建过大鼠的宫颈炎/糜烂模型，文献表示用苯酚胶浆注入到宫颈管内，再头高脚底5分钟（流到宫颈口）。在我实际操作时发现几个问题（1）注入时很难确定针管有没有伸入宫颈管，而且大鼠有两个子宫两个宫颈。（2）大鼠宫颈很小，难以注入要求的量（0.15ml）。（3）尝试注入在阴道，倒置大鼠使其流到宫颈，结果显示效果不佳。请有此造模经验的大神分享一下，万分感谢！

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平安喜乐1100

中药学医学生

23 小时前

求助，想交流一下LPS诱导BV2细胞的经验

1含完全培养基的细胞悬液，细胞10000个/孔铺96孔板，24小时后换完培配置的1ug/mlLPS诱导24小时，细胞存活率120-150%，NO含量7-17uM看文献大部分都是使细胞存活率下降或者跟空白差不多，2铺板贴壁24h后给药4小时再用lps造模细胞存活率也上升求LPS诱导BV2细胞经验，谢谢大家

809 浏览 · 2 讨论

儿科学医学生

23 小时前

【求助】LPS诱导BV2细胞NO检测无差异原因？？

实验目的是LPS诱导BV2细胞模拟小胶质细胞活化LPS浓度根据大多文献1μg/mL，刺激24h后检测NO（南京建成试剂盒），对照组和处理组没有差异，都在5μM左右，应该是没有活化。不知问题出在哪里……LPS(sigma 055:B5)，培养基配制2mg/mL分装冻存在-20℃应该没有问题，所以考虑是否细胞自身活化的问题。如果细胞自身活化了NO检测含量会增高吗，或者有什么方法处理细胞可回复静息状态呢？查了协和细胞库网站上的BV2形态如下图，请问这是静息状态吗？

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呼啦啦的圈儿

1 天前

大鼠肠微血管内皮细胞

求助园子里的各位大佬，有谁提过大鼠的原代肠微血管内皮细胞么？提取难度大不？能传大概几代啊？

271 浏览 · 2 讨论

1 天前

大家好，我刚接触细胞，现在用正在做LPS诱导BV2的炎症模型，我所用的LPS浓度是100ng/ml和1ug/ml，可是这两个检测出来的mtt与对照组几乎没有差别，一氧化氮检测也没有差别，我自己分析了一下原因，也麻烦大家给个意见。着急毕业请大家帮帮忙，谢谢各位了。1.铺板后我的BV2细胞几乎都是园的，再结合着数据，我猜想是不是，铺完板未加LPS的细胞就已经是激活状态了，那如果是这样，我该怎么办，怎么让他恢复静息状态2.LPS配制问题。我用PBS溶解LPS，配制成100ug/ml，之后再用无血清但含有1%双抗的dmem/f12 1：1培基稀释成100ng/ml和1ug/ml。我见有的说不加双抗，有

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生物医药资讯

已认证的机构号

1 天前

有奖直播 | 多能干细胞技术在疾病研究与药物开发中的应用

4 月 1 日国家卫健委正式宣布将「干细胞研究与器官修复」纳入国家重点研发计划，成为与「常见多发病防治研究」并列的核心任务，意味着国家对干细胞研究和再生医学的高度重视，也是科研人员的重大机遇[1]。同期！中国科学院团队在 Nature Communication 发表最新研究，证明了人诱导多能干细胞来源的原始巨噬细胞（hiPMs）及其条件培养基（hiPM-cm）在促进人类心肌细胞增殖和增强成年小鼠心脏再生的能力，可作为心脏疾病的潜在创新疗法[2]。干细胞技术在心脑血管、糖尿病、癌症及神经退行等多种疾病中展现出巨大的应用和治疗潜力。诱导多能干细胞（iPSC）也为疾病模型及机制探究、药物筛选和细胞

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动物实验生命科学

医疗行业从业者

1 天前

巴马猪膀胱新型纳米材料验证

巴马猪（动物实验）膀胱新型纳米生物材料验证，此次主刀凡医生

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医疗行业从业者

1 天前

想交流一下LPS诱导BV2的实验

细胞状态保持的比较好，但是LPS诱导效果一直比较差，很不稳定，模型组以NO为指标经常测不出差异，实验条件是用含血清的培养基种板12后，弃去培养基换成无血清培养基配的LPS溶液，诱导24h， LPS浓度是1ug/ml，24h，感觉模型组还是正常的生长，细胞形态也没什么改变考虑的几个方面是： LPS用了sigma和阿拉丁的，新买的应该没问题；96种板密度20000/孔，可能密度比较高，是不是影响造模效果；细胞也比较新一直保持好的状态铺板；尝试饥饿1h后造模也没什么差异，不知道大家有没有什么建议，感谢给予建议ps：做了很久，除非激活特别明显的情况下，小胶质细胞的激活后的形态改变一直也很让人迷惑

2135 浏览 · 10 讨论

胃肠病学医学生

1 天前

Image pro plus (IPP)批量分析免疫组化

是这样的，IPP分析免疫组化的图片时，手动操作下测出来mean IOD在100左右，换成便捷的宏操作macro处理图片数据的情况下，其他设置相同的情况下，mean IOD会高达几万，各位老师大佬同学们，谁能给我解释下这我怎么处理

791 浏览 · 5 讨论

医疗行业从业者

1 天前

蜱虫样本研磨处理

蜱虫样本研磨处理提取核酸做后续实验研究，实验室常用哪些自动化仪器可以取代手工操作？

324 浏览 · 2 讨论

医疗行业从业者

1 天前

YYT 1954-2025 重组胶原蛋白肽图指纹图谱分析

YYT 1954-2025 重组胶原蛋白肽图指纹图谱分析

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医疗行业从业者

1 天前

《细胞》3D胚胎外PGA模型的培养方法--深度解析

一、概述3D胚胎外原始生殖层聚集体模型（3D Extra-embryonic Primitive Germ-layer Aggregate, 简称 3D epiPGA或PGA模型）是一种旨在高度模拟人类胚胎植入后早期（原肠胚形成前后）胚胎外组织（特别是滋养外胚层谱系）起源和发育的体外三维干细胞模型。该模型的核心策略是：首先利用特定的信号通路小分子抑制剂和生长因子组合（典型方案包括骨形态发生蛋白4（BMP4）和GSK3β抑制剂（如CHIR99021）），在特定时间窗口内精确诱导人胚胎干细胞（hESC）或诱导多能干细胞（hiPSC）高效、同步地分化为胚胎外中胚层（Extra-embryonic M

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医疗行业从业者

1 天前

Cell |用干细胞造出“人造羊膜”，现人类胚胎发育关键阶段

羊膜是包围在胚胎外面、充满羊水的薄膜性结构，保护胚胎免受外界物理损伤并维持其稳定的生长环境，传统上认为提供机械保护，但近期研究表明它还能通过信号传导影响胚胎发育模式。羊膜主要由两层细胞构成：羊膜外胚层（Amniotic ectoderm）；是上皮细胞层，直接与羊水接触，负责调节羊水成分、液体交换和屏障功能胚外中胚层（Extraembryonic mesoderm），是支持性细胞层，提供结构稳定性，与其他胚胎外组织（如胎盘）连接，参与信号交流Amniotic Cavity (羊膜囊) Epiblast(外胚层) Yolk Sac(卵黄囊)这项研究建立了一种可靠的3D干细胞衍生人类类羊膜模型（PG

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生物医药资讯

已认证的机构号

1 天前

组学必看！布鲁克空间生物学全球巡演--中国学术专场（多重福利）

6 月 24 日布鲁克开启「Galaxy Spatial Tour 空间探索之旅」全球巡演中国学术专场。助力中国科研工作者更好地应用空间组学技术、突破研究边界！中国学术专场特别邀请中国科技大学孙成教授、苏州大学冯宇教授和布鲁克首席科学官 Joseph M.Beechem 等国内外知名学者，围绕空间生物学领域的研究热点和难点、空间多组学技术优势、疾病机制解析和治疗应用等，分享他们利用空间多组学技术开展的前沿应用和最新研究成果，总结研究心得和未来热点展望。其中，多位中国科学家的空间生物学成果在今年发表于 Cancer Cell、Nature Genetics、Clin Transl Med.、Jo

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细胞生物学其他学科医学生

1 天前

请各位老师帮我看看这是什么类型的污染，我后续培养时多加注意。一共培养了3瓶原代皮肤成纤维细胞，培养期间加了抗支原体试剂，三抗，双抗。其中一瓶污染情况如图：培养基中有白色沉定，晃动会导致培养基浑浊

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小儿神经内科医师

1 天前

Rett综合征小鼠

求购Rett综合征模型小鼠，最好是现成的

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心血管病学医学生

1 天前

有没有广州的能做流氏的公司啊

广州哪家公司能做流氏啊，上门取样

178 浏览 · 2 讨论

神经外科医师

1 天前

TCGA数据库官网数据下载结束

经过3个昼夜拼搏，反复使用多种手段，最终搞定TCGA官网数据下载。还是吃了计算机基础差的苦，真是又菜又爱玩！

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311 浏览 · 3 讨论

普通外科学医学生

1 天前

请问哪些公司构建重组质粒比较好啊？

用于分子实验。

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