【求助】我刚接触ELISA，阴性对照的OD值总是>0.1,请帮我分析一下，多谢

我在摸索测CMV的IgG的ELISA条件，抗原是以前制备的，为4mg/ml，800倍稀释用BSA及明胶封闭，血清100倍、抗人IgG5000倍稀释，结果采用经欧盟的标准IgG试剂盒检测为阴性的在预实验中终点OD值在0.5左右。实验中抗原的倍比稀释及血清的倍比稀释对结果影响均不大，是不是抗原不纯？
请教① 明胶封闭与BSA封闭的机理不同吗？②CMV的抗原制备方法及如何提高纯度？③硫柳汞放4℃冰箱未用棕色瓶行吗，叠氮的优势在哪，防腐剂对pH值没有影响吧？④PBS-tween不放冰箱行吗？