（求助）ELISA时用1M硫酸终止颜色会很快消退

近来几次做ELISA等到加完TMB避光显色后，直接加自己配 的1M硫酸终止，可从左边加到右边时，左边的已经开始很快的由黄色退成透明，然后由左到右颜色是明显的逐渐变深，就是越后面终止的，颜色越深，这样读板的时候，就失去了OD值的比较意义了，非常苦恼，又一天的工作报废了。
希望有哪位高手知道出现这个问题的原因是什么？如何可以避免呢？
TMB是SIGMA买的片剂，自己根据说明配制的，1M硫酸也是自己配制的，但在以前同样做，并没有发现过这种颜色消退现象
谢谢各位高手！