【求助】胰蛋白酶（Trypsin）酶解效果不佳,如何解决？
这个帖子发布于 18 年零 84 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
目前正在建立一个蛋白的肽图检测方法（HPLC）,该蛋白分子量为150KD左右,由二硫键连接形成等二聚体。
现采用如下方法处理：用1%NH4CO3对样品透析4h，透析后浓度为1mg/ml，TPCK-Trypsin用1%NH4CO3配制成1mg/ml的溶液；按0.1%的比例加入β-巯基乙醇，以还原二硫键；再以1：20（W/W）比例加入上述胰蛋白酶，37℃条件下酶切24小时；以1：10（V/V）的比例加入1N HCL终止反应；混匀，用0.45μm水相针式滤膜过滤后上样100μl。
但是酶切效果不是很理想，蛋白仍有较多没被降解，但是我查阅相关资料，似乎1：20（W/W）的比例已经足够。那么哪些步骤可以改进以提高酶切效果呢？另外，对于这样的大分子蛋白，如何评价酶解的效果？因为酶解产物太多，几次结果往往不能非常一致。
谢谢！
现采用如下方法处理：用1%NH4CO3对样品透析4h，透析后浓度为1mg/ml，TPCK-Trypsin用1%NH4CO3配制成1mg/ml的溶液；按0.1%的比例加入β-巯基乙醇，以还原二硫键；再以1：20（W/W）比例加入上述胰蛋白酶，37℃条件下酶切24小时；以1：10（V/V）的比例加入1N HCL终止反应；混匀，用0.45μm水相针式滤膜过滤后上样100μl。
但是酶切效果不是很理想，蛋白仍有较多没被降解，但是我查阅相关资料，似乎1：20（W/W）的比例已经足够。那么哪些步骤可以改进以提高酶切效果呢？另外，对于这样的大分子蛋白，如何评价酶解的效果？因为酶解产物太多，几次结果往往不能非常一致。
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