【求助】关于避免移码的tips

今天在为双酶切设计引物，为了防止移码突变，一直小心翼翼的。我总结出几点体会，请大家看看对不对.嘻嘻～
如果上游引物引入ATG,下游引物引入stop codon，那们就可以不需要考虑移码，反正都是从ATG开始编码，到stop codon结束。
如果不引入ATG或者stop codon，那么就要看用的酶切的识别位点是几个碱基，如果识别6个，12个这样3的倍数，就不会移码。如果不是3的倍数，像4个碱基，8个碱基，就会移码了。
例如，某载体上的一段序列
－－－－CTCGAGCACCACCACCACCACCACTGA-------
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其中CTCGAG是MCS的最后一段，是XhoI的识别位点，紧接着是6×HIS，然后是TGA stop codon。
如果下游引物就是利用XhoI酶切位点，那就不用考虑移码问题，保护碱基+CTCGAG+目的基因CDS的最后一段,就是下游引物了。
希望大家指正。嘿嘿。