【求助】救命！淋巴细胞增殖试验无结果
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近日试验需要用包被的CD3和CD28单抗对细胞刺激后进行后续试验，故首先用3H TdR法检测细胞增殖试验来验证抗体活性和包被效果，结果一连两次试验都是刺激组和对照组无差异！恳请高手指点！！！
试验步骤：
1）CD3 、CD28单抗购自于eBioscience公司，名称分别为 Functional Grade Purified anti-human CD3和Functional Grade Purified anti-human CD28，原浓度均为1ug/ul，用PH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液稀释至1ug/ml，加入ELISA 实验专用96孔酶联板，100μL/孔，4度过夜。
（0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液：精密称取碳酸钠 0.32g ，碳酸氢钠 0.586g ，加水溶解，定容至200ml。）
2）用PBS缓冲液（PH 7.4）轻轻洗板3次，洗掉没有吸附上的蛋白。(用微量加样器每孔轻轻滴加200ul PBS缓冲液，3-5分钟后缓慢吸出)
3）调节Jurkat T细胞密度分别为1x104个/ml 、1x105个/ml 、1x106个/ml，按100μL/孔加入到上述包被的板子中，每个浓度分别设三复孔。另外每个浓度的细胞在未包被的孔中也分别加入三复孔做对照。
4）37℃培养，36小时后在每孔加入1ul 3H，12小时后液闪计数。
试验步骤：
1）CD3 、CD28单抗购自于eBioscience公司，名称分别为 Functional Grade Purified anti-human CD3和Functional Grade Purified anti-human CD28，原浓度均为1ug/ul，用PH9.6的0.05M碳酸盐缓冲液稀释至1ug/ml，加入ELISA 实验专用96孔酶联板，100μL/孔，4度过夜。
（0.05M pH9.6碳酸盐缓冲液：精密称取碳酸钠 0.32g ，碳酸氢钠 0.586g ，加水溶解，定容至200ml。）
2）用PBS缓冲液（PH 7.4）轻轻洗板3次，洗掉没有吸附上的蛋白。(用微量加样器每孔轻轻滴加200ul PBS缓冲液，3-5分钟后缓慢吸出)
3）调节Jurkat T细胞密度分别为1x104个/ml 、1x105个/ml 、1x106个/ml，按100μL/孔加入到上述包被的板子中，每个浓度分别设三复孔。另外每个浓度的细胞在未包被的孔中也分别加入三复孔做对照。
4）37℃培养，36小时后在每孔加入1ul 3H，12小时后液闪计数。
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