【求助】急求pMD-18-T-simple vector 序列！！！！
发布于 2006-11-23 · 浏览 1849 · IP 上海上海
这个帖子发布于 18 年零 176 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
谁知道pMD-18-T-simple vector 序列嘛？
我用已经构建好的pMD-18-T-C3d质粒进行PCR定点突变，用试剂盒的是TaKaRa MutanBEST Kit（试剂盒原理是PCR定点突变、然后是Blunting、Kination反应，最后进行自身连接，再转化感受态细胞），将其插入片段C3d的3’端突变3个碱基。
但是最终的测序结果显示插入片段3’端的起始80个bp都是正确（突变位碱基和预期是一样的），而随后的片段序列则完全错误，也就是进行自身连接的地方至5’端完全错误，会不会是自身连接有问题。
那位专家能帮帮忙,给我提示一下！！！不甚感激！！！！！！
我用已经构建好的pMD-18-T-C3d质粒进行PCR定点突变，用试剂盒的是TaKaRa MutanBEST Kit（试剂盒原理是PCR定点突变、然后是Blunting、Kination反应，最后进行自身连接，再转化感受态细胞），将其插入片段C3d的3’端突变3个碱基。
但是最终的测序结果显示插入片段3’端的起始80个bp都是正确（突变位碱基和预期是一样的），而随后的片段序列则完全错误，也就是进行自身连接的地方至5’端完全错误，会不会是自身连接有问题。
那位专家能帮帮忙,给我提示一下！！！不甚感激！！！！！！
最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 1849
2 收藏点赞
