【求助】Tricine SDS PAGE胶中的气泡问题

做了2-3个月的Tricine SDS PAGE，园子里关于该电泳技术的帖子也都看过了，还是有很多问题存在，不知其他的同仁有没有碰到过我这种问题，如果有好的方法还请帮帮忙。
我的蛋白8.7kD,一般做3层胶（5％，10％，16.5％），先40-50V电泳1-2h,然后100V恒压，4度电泳6-8h,有时候可以跑出很漂亮的带，但有时候却很惨，16.5％的分离胶中时不时出现2个气泡，让某2个孔的样品滞留在气泡外围。对于这个问题我也想过很多办法，比如对胶进行抽气30min,还有担心高浓度的胶凝固太快，将抽气后的胶放入冰箱或冰水中预冷，再加APS和TEMED，搅拌均匀后再灌胶，而且担心胶现做现用，也是凝固不好产生气泡的原因，故将做好的胶放置过夜，第二天再电泳，这种措施确实有助于做好胶，但即便这样，在不经意的时候，胶内总会冒出1-2个大气泡，尤其是准备做图的时候，真是很郁闷，我不知道这到底是什么原因，将下层胶中的甘油换成尿素，问题也还是没有解决，不知园子里的做胶高手有没有什么好的建议。
还有一个问题是，配置负极缓冲液时，同样的试剂，为什么有时候pH值是8.15，有时候却是8.0，这问题出现了几次，我也不知道是什么原因，好像不太像是pH计的原因，因为pH计一直表现比较稳定，不知有没有其他同胞碰到过这样的问题，我现在还在想办法做2张图，呵呵，有经验的同志可以支持我下。