帮忙分析一下CoIP结果，谢谢了。告知小弟一些经验

最近作了一次CoIP，由于是初学者，不知道什么地方应该注意或者有什么经验。请教各位老师帮助。真的比较急。谢谢了。很想知道操作经验。

下面是我的CoIP结果，请大家帮助分析一下。
检测IP内的一个蛋白与P65结合，在IP里面抗出了所需条带，但在normal IgG里面也有相应条带。不知道是怎么回事。
我做的时候最后沉淀洗的时候是用PBS洗的，没有+TWEEN20，这个是不是问题的所在（没有将非特异洗去）。其次，我洗的时候不敢把沉淀悬起来，怕影响蛋白相互作用，请问是否要悬起，洗应该如何操作呢。