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关于亲和层析树脂的洗脱缓冲液

发布于 2004-01-05 · 浏览 5010 · IP 贵州贵州
这个帖子发布于 21 年零 125 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我正在做一个C端融合了HIS6的酶蛋白的纯化。我用的是BD Biosciences Clontech公司的TALON tm Metal Affinity Resins钴亲和层析树脂,里面使用的所有缓冲液均是以磷酸盐为主要成分的缓冲液。我的目的蛋白被洗脱后进行酶活性的测定,测定的刚好是催化底物释放出的磷酸盐。由于洗脱液中的磷酸盐浓度为50mM-75mM,而酶活测定的磷酸盐浓度是nM级的,所以酶活测定时本底太深。如果将洗脱的酶液进行透析后再测定活性,由于洗脱时是每0.5ml洗脱液收集1管,总共10管,透析后还得浓缩才能用于SDS-PAGE。这不但麻烦,而且不同洗脱管最后的浓缩倍数不同。

现在,我想用Tris-HCl缓冲液替代磷酸盐缓冲液,不知道行不行。因为我是从我同学那里分的2ml树脂,所以希望能不浪费。

用户手册上提供的缓冲液有:
1.Phosohate buffered saline (PBS:pH7.5)
Na2HPO4 58mM
NaH2PO4 17mM
NaCl 68mM
2.1╳Extraction/Wash buffer(pH7.0)
50mM Sodium Phosphate
300mM NaCl
3. 1╳Elution buffer(pH7.0)
50mM Sodium Phosphate
300mM NaCl
150mM Imidazole

我准备把它们换成以下配方:
1.Tris buffered saline (PBS:pH7.5)
Tris 75mM
NaCl 68mM
2.1╳Extraction/Wash buffer(pH7.0)
50mM Tris
300mM NaCl
3. 1╳Elution buffer(pH7.0)
50mM Tris
300mM NaCl
150mM Imidazole

希望各位有经验的大侠提提建议。
谢谢!





























最后编辑于 2022-10-09 · 浏览 5010

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