【求助】请帮忙看看还能怎样消除引物二聚体，谢谢！
这个帖子发布于 19 年零 107 天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我做的DNA扩增，目的片段在200-400bp之间不等，但是电泳后的结果总是有比较清楚的引物二聚体条带，我试过了很多方法，包括减少Mg离子浓度、降低退火温度、减少引物浓度、增加模板量、加用甘油，以及园子里有人介绍的将引物煮沸然后立即冰浴等方法，结果都没什么效果。
现在我用的反应体系如下：
Mg离子：2ul （25mM）
dNTP： 4ul
10XBuffer：5ul
引物：各2ul（10pmol/ul）
模板DNA：15ul（约30ng/ul，紫外分光光度计读出的结果）
Taq酶：0.3ul （1.5U）
（也试过加甘油3ul）
dd水：加至50ul
反应条件是：
94℃ 2min
94℃ 30sec
57℃ 45sec
72℃ 30sec
72℃ 10min
麻烦各位帮忙看看，我还能怎样改进实验消除引物二聚体。谢谢！！
现在我用的反应体系如下：
Mg离子：2ul （25mM）
dNTP： 4ul
10XBuffer：5ul
引物：各2ul（10pmol/ul）
模板DNA：15ul（约30ng/ul，紫外分光光度计读出的结果）
Taq酶：0.3ul （1.5U）
（也试过加甘油3ul）
dd水：加至50ul
反应条件是：
94℃ 2min
94℃ 30sec
57℃ 45sec
72℃ 30sec
72℃ 10min
麻烦各位帮忙看看，我还能怎样改进实验消除引物二聚体。谢谢！！
3 收藏点赞
