【请教】转膜遇到问题

各位老师好：
最近转膜，老是转不上，郁闷中，烦请大家指点指点！
操作步骤：
1.  将包含目的片段的胶切下（2.5 * 3 cm2）,浸泡在转膜buffer中>30min。
2.  剪与胶同样大小的whatman 3mm滤纸各三层，与胶一起浸泡在转膜buffer中。
3.  剪大于胶（各边>1-2mm）, 浸泡在转膜buffer中>15min.
4.  按“阴极－支持垫－滤纸－胶－NC膜－滤纸－支持垫“顺序叠放好，每叠放一样用玻棒排气泡，放入转移槽，夹紧，灌满转膜buffer。电泳槽内加满转膜buffer。
5.  湿法转膜，放入4度冰箱进行电泳！电泳参数为恒流，分别试过100,200，300mA，电泳时间为90min。转膜结束后用丽春红S染色5min，都未见转膜成功，将相应的胶考染，也未见条带，不知道我的蛋白带跑那里去了？我的目的蛋白是44KD.上样量绝对足够考染银染检测！
试过恒压100V,但只能达到60V，且此时发热量极大（达到最大电流500mA）。
请问我的转膜问题该如何解决？
附：
转膜buffer摘自《精编分子生物学实验指南》“是在4LdH2O中加入18.2gTRIS碱和86.5g甘氨酸，再加入900ml甲醇，定容至6L，PH 在8.0-8.3”后来又补充SDS至终浓度为1%。

各位帮帮忙啊～～！