研究IF：8.4 基于ERA重组聚合酶扩增技术，开发一种即时的单核苷酸变异分析方法
背景：
基因检测SNV检测是一种通过分析个体基因组中的单核苷酸变异（Single Nucleotide Variation，简称SNV）来评估个体患风险、药物反应性和遗传特征的技术方法，目前在遗传性疾病的诊断中具有重要价值。然而，由于测试时间长和实验条件有限，SNV分析在临床的广泛应用面临许多困难。
研究内容：
近年来，等温扩增成为了SNV检测的新选择，特别是重组酶聚合酶扩增技术。ERA技术（Enzymatic Recombinase Amplification，酶促重组等温扩增技术）因其在仅20min内实现快速核酸检测和CRISPR（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）检测系统的无缝集成而引起了公众的广泛关注。快速的测试速度和简单的实验操作使ERA更容易完成POC检测。为了达成ERA技术快速识别鉴别SNV的方法，本次研究提出一个通用检测策略基于链位移触发重组酶聚合酶放大（sd触发ERA）的新颖办法，从样品提取到获得结果整个实验过程可以在35 min以内完成，这表明了ERA SNV检测的实用策略，具有巨大的临床应用潜力。
项目解读：
近年来，等温扩增成为了SNV检测的新选择，特别是重组酶聚合酶扩增技术。ERA技术（Enzymatic Recombinase Amplification，酶促重组等温扩增技术）因其在仅20min内实现快速核酸检测和CRISPR（clustered regularly interspaced short palindromic repeats）检测系统的无缝集成而引起了公众的广泛关注。快速的测试速度和简单的实验操作使ERA更容易完成POC检测。为了达成ERA技术快速识别鉴别SNV的方法，本次研究提出一个通用检测策略基于链位移触发重组酶聚合酶放大（sd触发ERA）的新颖办法，从样品提取到获得结果整个实验过程可以在35 min以内完成，这表明了ERA SNV检测的实用策略，具有巨大的临床应用潜力。
结果显示：
基本的可行性验证：ERA（1−3）和sd触发ERA策略（4−6）通过实时琼脂糖凝胶电泳(A)，荧光分析(B)和横向流动分析(C)检测突变目标（1、4），野生型目标（2、5）和空白对照（3、6）。
A)通过sd触发ERA策略的荧光分析检测突变型（a、c、e）和野生型（b、d、f），8 bp（a、b），9 bp（c、d)，10bp（e、f)靶点域长度。
(B)sd触发ERA策略的侧向流试纸条法检测突变型（1、3、5）和野生型（2、4、6），8 bp（1、2），9 bp（3、4)，10bp（5、6)靶点域长度。
(C)sd触发ERA策略的荧光分析检测突变型（a、c、e）和野生型（b、d、f），17 bp（a、b），15 bp（c、d)，13bp（e、f)靶点域长度。
(D)sd触发ERA策略的侧向流试纸条法检测突变型（1、3、5）和野生型（2、4、6）， 17 nt (1、2）、15 nt (3、4）、13 nt (5、6）靶点域长度。
(E)sd触发ERA策略的荧光分析，检测35℃（a、b）、37℃（c、d)、39℃（e、f）、41℃（g、h)条件下的突变型（a、c、e）和野生型（b、d、f）靶点。
(F)sd触发ERA策略的侧向流试纸条法，检测在35℃（1、2）、37℃（3、4）、39℃（5、6）和41℃（7、8）的温度条件突变型（1、3、5、7）和野生型（2、4、6、8）靶点。
(A)实时荧光曲线为2 ng/μL，1 ng/μL，200 pg/μL，100 pg/μL，20 pg/μL，10 pg/μL，密码子17（A>T）突变基因组DNA（曲线a到g），以及2 ng/μL野生型基因组DNA（曲线h）。
(B)通过绘制不同浓度的突变基因组DNA，构建Rt的校准曲线，误差条表示三个重复实验的标准差。
(C)通过sd触发ERA进行2 ng/μL、1 ng/μL、200 pg/μL、100 pg/μL、20 pg/μL、10 pg/μL、4 pg/μL密码子17（A>T）突变基因组DNA（1-7）和2 ng/μL野生型基因组DNA（8）的侧向流试纸条法分析。
(D)对20pg/μL密码子17（A>T）突变体基因组DNA进行侧向流试纸条法分析，不同检测时间，从10到60 min不等。
比较ERA检测方法与临床联合PCR和反向交叉杂交检测真实临床标本中密码子17（A>T）突变的方法对比。
相关产品：本次实验采用的基础型核酸扩增试剂盒（ERA法) 和侧向流检测试纸条来自先达基因。(点击产品名称或货号即可查看详细信息）
