免疫比浊法检测前白蛋白，出现0或负值的元凶

病例信息

肝素锂抗凝血浆样本，血浆透亮，无乳糜，无溶血，日立生化分析仪检测前白蛋白为0

仪器报警＜Test，查看反映曲线，发现R1试剂加入后初始浊度太高，有干扰？反复查看样本状态，确认为透亮

将样本稀释2倍复测，仪器值31，实际值31*2=62，查看反应曲线，初始吸光度从3600下降到1300

稀释4倍，初始吸光度下降到300，仪器值13，报警＜Test，提示可能稀释过度

稀释8倍，仪器值3，报警＜Test，初始吸光度下降到100，各个测量点不稳定，提示稀释过度

病例讨论

确认样本中有某种干扰物质，R1试剂加入后与样本反应导致非特异的浊度增加，可能是什么物质干扰呢？仔细查看说明书。

PA反应原理:人血清或血浆中前白蛋白与其相应抗体（羊抗人前白蛋白抗体）在液相中相遇，立即形成抗原-抗体复合物，并形成一定浊度。分析仪按一定的体积比例将样品和试剂加入测试杯中，分析仪采用终点法在340nm波长下测定吸光度，通过同样处理的校准品比较，即可计算出样本中前白蛋白含量。

说明书提示干扰物质在下表所示浓度范围内，对测定值不会造成影响。

此样本均无超过浓度的三种物质。

仔细查看此患者其他检验结果，发现纤维蛋白原异常高，为10.78g/L，难道是高纤维蛋白原影响？

我们用的是肝素抗凝血浆，肝素的抗凝机制是阻止纤维蛋白原激活，从而阻止血液凝固，患者纤维蛋白结果异常增高，血浆中存在大量纤维蛋白原，有很多报道已指出大分子蛋白对检测会有干扰。

于是找来患者的血清管分别与R1试剂混合，来做对比

至此真相大白，血浆样本确实是R1试剂反应导致了浊度增加。

R1试剂成分为40mmol/L磷酸盐缓冲液 和60g/L的聚乙二醇（PEG），缓冲液一般不会参与反应，那只能是聚乙二醇。

1、PEG 诱导蛋白质聚集：聚乙二醇的存在可能导致纤维蛋白原部分凝集或析出，从而增加溶液中的微粒浓度，进而导致浊度增加 ， 聚乙二醇与蛋白质之间存在不利的相互作用，这会促使蛋白质聚集以减少这种不利影响。

2、疏水相互作用增强：聚乙二醇可能增强蛋白质分子间的疏水相互作用，促使蛋白质聚集。研究表明，聚乙二醇与蛋白质之间存在氢键和疏水相互作用，其中氢键是主要作用力。

3、溶液稳定性降低：加入聚乙二醇可能改变纤维蛋白原的溶解度，导致其在溶液中的稳定性降低，从而形成可见的颗粒或聚集体，增加浊度。

前白蛋白（PA），也称为转甲状腺素蛋白，主要由肝脏合成 。它是一种小分子蛋白，在临床上被广泛用作营养和预后指标。前白蛋白的生化检测在评估营养状况、肝功能以及预后等方面具有重要意义。前白蛋白还是一种负性急性时相蛋白，在炎症反应中其合成会减少。因此，前白蛋白水平可以反映机体的炎症状态。

此患者营养状况不错，可能与炎症有关，急性时相反应蛋白都较高，包括纤维蛋白原，CRP，SAA和IL6，与较低的负向急性时相反应蛋白（PA，60mg/L左右）形成闭环回路。