用Ni柱纯化包涵体蛋白，目的蛋白和杂蛋白结合一起洗脱，SDS条带也只有一条

右边两个条带是300mM咪唑浓度洗脱下来的蛋白条带，切胶测序验证有少量我的目的蛋白，大部分是大肠杆菌本身蛋白

破碎菌体用的是裂解缓冲液（50mM Tris-HCl，2mM EDTA ，100mM NaCl,0.5% Triton--X100）＋溶菌酶）超声，然后按照Hia标签蛋白纯化试剂盒（包涵体蛋白）步骤做的，所有使用的buffer里都加了8M尿素

有什么建议吗？