SD雄性大鼠主动脉原代平滑肌细胞

做了好几次原代，用组织贴壁法，都没有看见细胞爬出来，球球各位大佬给点意见，基本操作是：①取材，预冷pbd清洗两遍。②将血管用针头定在有分离黑胶板的大皿上，在显微镜下剥去组织血块。③分离干净后，用巴氏管吸取pbs冲洗几遍。④剪开血管，一角用镊子压着，用弯镊推着分离。⑤剥离出的中膜在20％低糖培养基下剪碎成小块，贴在25瓶底(一只鼠一瓶)，加5ml培养基倒放在培养箱，两小时后再翻面。整个过程半个小时到四十分钟。

做了这么几次都没细胞爬出来或者有就一两个，太心累了，求求指点。