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[求助]提取小鼠腹腔巨噬细胞不贴壁,怎么办?

最后编辑于 2022-10-09 · IP 北京北京
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这个帖子发布于 19 年零 200 天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
这一段时间一直需要提取小鼠腹腔巨噬细胞,我用的是Balb/c小鼠,因为提取了有一段时间了,我也参考了园子里朋友们的经验,可是总是不稳定,有时候贴壁非常好,有时候根本就不贴壁(没有污染!)。很着急,这一点就过不去的话,后续的实验没法做。
我提取的步骤是:
(1)摘眼球放血处死小鼠(减少提取细胞中的红细胞)
(2)放于75%酒精中浸泡3min,
(3)于超净台中剪开皮肤,注入腹腔5ml无血清(有血清的也作过)1640培养基,揉搓腹部
(4)抽出腹水,离心,800rpm,5min,
(5)用含10%血清的1640重悬至1×10(6),铺于6孔板(2ml/孔)或96孔板(0.2ml/孔)。
(6)置于培养箱中培养,有时候发现2h就贴别很好,有时候4h贴壁也非常少呢?

不知道什么原因,请知道的朋友指教,非常感谢。








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