THP-1细胞培养

THP-1是人急性单核细胞白血病细胞，是单核-巨噬细胞相关研究中的常用细胞系工具，可通过PMA（佛波酯）诱导分化为M0型巨噬细胞，然后根据实验需求进一步诱导为M1或M2型巨噬细胞。

细胞形态：悬浮细胞，圆形，大小均一，小而透亮（Fig1来自ATCC网站）。

注意：显微镜下观察之前，可以轻轻晃动培养瓶或孔板，静置片刻后使得细胞沉降并均匀分布，有利于细胞密度和数量的判断。博主养出来的THP-1形态更规则，40倍镜下细胞饱满、无显著伪足，形态像饱满的珍珠，分布均匀而不聚团。

Fig1 参考自ATCC网站（ https://www.atcc.org/products/tib-202 ）

2. 冻存与复苏：可使用商品化无血清冻存液，密度控制在约5*106/ml为宜。复苏时，150G 3min，根据细胞数量酌情使用T25 flask或6孔板。

注意：博主的经验是冻存的时候，一个T25 flask静置后铺展为一层均匀细胞至80%，150G 3min即可收获约800万细胞，可冻存3支（每支使用无血清冻存液500μL，新赛美C40050）；复苏时一支细胞可铺在六孔板的一个孔中，培养基3mL，24小时后根据细胞生长情况进行换液处理，3天内不离心。

3. 培养要求：90% RPMI 1640 + FBS 10% + 1% Pen Strep双抗 + 0.05mM β-mercaptoethanol。例如 500mL RPMI 1640 + 56mL FBS +5.6mL Pen Strep双抗（货号 Gibco 15140122） + 0.05mM β-mercaptoethanol（货号 Gibco 31350010）。

注意：

（1）基础培养基：如果细胞状态不佳，例如进行转染、病毒感染等操作，可尝试使用ATCC改良RPMI 1640（Gibco 货号A1049101，ATCC 货号 30-2001，Absin 货号 abs9468） ，该培养基具有更高的糖分（4.5g/L）、更稳定的pH缓冲体系。

（2）血清：可短期提高至20%。不需要进行热灭活。THP-1对血清要求较高，且因为博主目前在进行慢病毒感染与加压筛选，所以使用的是Hyclone New Zealand Characterized Foetal Bovine Serum（货号 SH30406.05），浓度是15%。

（3）0.05mM β-mercaptoethanol作为抗氧化剂，由于性质不稳定，所以不能在培养基中预先添加。

Fig 2 参考自ATCC网站（ https://www.atcc.org/products/tib-202 ）

4. 传代方式：THP-1有密度依赖性，且在偏酸性的环境中生长良好，常通过半换液的方式进行换液以及传代。

注意：

（1）博主的经验是一个T25 flask静置后铺展为一层均匀细胞至90%（约900万细胞），可吹匀后直接进行1:2传代，1-2天即可再次传代。博主一般1:2传代后补完全培养基至4-5mL，24小时后若细胞状态良好，且暂时不足90%传代，再补加2-3mL。

（2）由于半换液的补液方式会使得培养基的糖分达不到基础培养基原始的葡萄糖浓度，博主一般4-5天会低速离心（120G 3min），以400万/T25 flask的细胞量重悬到T25 flask中。

（3）由于离心对细胞有一定损伤，在需要冻存的时候采用150G 3min，其他换液或者加药重悬都是120G 3min。

（4）半换液时，吸液的动作要轻柔，不然可能将细胞沉淀吸走，使得剩余的细胞密度过低，引起细胞聚团以及生长速度受限。

附录：在THP-1培养和实验过程中，铺板密度和培养基的使用量可参考下图Fig 3。

Fig 3 THP-1铺板密度参考，百分比为细胞大致密度

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