淋巴细胞亚群分析及注意事项

1.关注单核细胞干扰

CD45联合SSC设门圈取淋巴细胞，尽可能排除其他细胞或颗粒干扰，门内淋巴细胞的纯度应>95%。

解决方案：如果样品中的淋巴细胞数量较少或者单核细胞对淋巴细胞分群有干扰，推荐同时加入CD14作为设门抗体，圈取CD14-细胞群（用于排除单核细胞干扰）。

2.关注异常细胞群

T、B和NK细胞相对计数的总和应占淋巴细胞总数的100%+5%范围内。某些血液病可能T、B和NK总和值异常。

CD4+T细胞和CD8+T细胞百分比的总和宜在CD3+T细胞的百分比+5%之间。如样品中含有一定数量的非常见T细胞亚群，如双阴性或双阳性细胞，可能会超出以上限制。

3. 排除血浆中异嗜性抗体/球蛋白干扰

l CD4+CD8+DPT假性增高

l CD45染色减弱

l CD3染色减弱

l 多个抗体染色不佳

解决方案：①染色前洗涤②更换抗体③加HBR阻断剂

4.关注样本与抗体的比例

样品和抗体的比例应参考试剂说明书进行操作。 如进行淋巴细胞亚群单平台绝对细胞计数，应预先准确计数样品中的白细胞浓度，当样品中的白细胞浓度＞20 ×10⁹ /L时，使用含有1％白蛋白或其他蛋白的磷酸盐缓冲液（PBS）稀释至适当范围内。

5. 对于溶血效果欠佳的样品（如来自某些黄疸或高脂血症等患者），可釆用密度梯度离心法分离单个核细胞（使用此方法时需要在检验报告中注明，因为该法影响淋巴细胞亚群绝对细胞计数和各亚群占有核细胞比例的检测结果）