求助|逆向蒸发法制备脂质体

请教各位大神，这是我的脂质体制备方法：精密称取蛋黄卵磷脂120mg（磷脂浓度24mg/ml）和胆固醇30mg置于50ml离心管中，7.5ml乙醚溶解（有机相：水相3：1）作为油相，另取甲氨蝶呤 5 mg ，用0.01M PBS（pH=7.4）2.5mL溶解作为水相，注射器均匀将水相加入至油相中，冰浴探头超声（功率34W，“1”on“1”off) 8 min，形成w/0型乳剂，放置半小时外观看来较为稳定，30度减压旋转蒸除梨形瓶中有机溶剂（200r/min，0.0125MPa）20分钟形成半固体凝胶，底部有大块凝胶沉积，加入同体积0.01 M PBS(pH=7.4)2.5mL，30度减压（全真空）旋转蒸发78分钟，除去残留有机溶剂，底部还有物质沉积无法洗脱。最后测出来包封率只有7%，我想提高包封率，有几个疑问：1.探超形成均匀稳定W/O形这步具体详细是如何操作的呢，我的步骤正确吗，因为我稍微一下改变磷脂量，磷脂胆固醇比例，有机相水相比例这三个因素，形成的乳剂半小时内都会分层，总是会有分层情况，探超这步如何做，怎样才能形成均匀稳定不分层乳剂

2.旋蒸形成半固体凝胶状后，就能加PBS了吗，还是等它变成流动胶态物质再补加PBS

3.旋蒸需要注意什么，旋蒸过程中梨形瓶中底部总是有不少凝胶沉积正常吗

4.PBS浓度影响大吗，0.01M的如何