长片段PCR扩增
大家好,想请问一下大佬们
我有几个基因片段需要扩增,长度为:1500+bp、3000+bp、6000+bp不等
但是已经扩增好几次了跑胶均没有条带。
模板是细胞cDNA和血cDNA。基因在细胞中表达程度也还行。
目前用过AG、诺唯赞、巨匠生物的高保真酶。预变性时间为3min,延伸时间为30/S。
有什么方法可以改进一下 将片段扩增出来呢?
如果我怀疑引物有问题的话?能否跑qpcr验证引物特异性?
万分感谢🙏图片是我用AG酶、和巨匠生物分别扩展不同条带的跑胶结果🙏



大家好,想请问一下大佬们
我有几个基因片段需要扩增,长度为:1500+bp、3000+bp、6000+bp不等
但是已经扩增好几次了跑胶均没有条带。
模板是细胞cDNA和血cDNA。基因在细胞中表达程度也还行。
目前用过AG、诺唯赞、巨匠生物的高保真酶。预变性时间为3min,延伸时间为30/S。
有什么方法可以改进一下 将片段扩增出来呢?
如果我怀疑引物有问题的话?能否跑qpcr验证引物特异性?
万分感谢🙏图片是我用AG酶、和巨匠生物分别扩展不同条带的跑胶结果🙏