救救孩子！样本统一浓度后内参不齐

大佬们好!

这是我近期跑WB的一组结果，上面一幅图是第一部分miRNA效果验证实验，下面那副是第二部分miRNA带了inhibitor的验证实验，然后WB图的上半张是我的目的基因N蛋白，40多kDa左右，下半张WB图是我的内参基因，亲环素cyclophilin A。

然后我现在的主要问题是：内参不齐。

样本来源：原本我是只检测上清中目的蛋白的含量，但是内参GAPDH和亲环素都非分泌型蛋白，检测不出条带，所以最后样本是细胞和上清蛋白的1：1混合，再统一浓度后为1.82ug/ul，变性后是上样了10ul/孔。